显微镜电动平台在人骨髓基质细胞观察的应用——MW

德国Marzhauser公司（MW）是一家专注于显微镜电动载物台领域和手动载物台领域的先进OEM制造商，他们的主要产品有电动/手动载物台、轴控制器、载物台嵌入器、显微操作器、电子控制器等，这篇文章主要介绍了Marzhauser的产品在细胞科研中的前沿科学应用，如：倒置显微镜载物台、机械化样品台、聚焦驱动器和Marzhauser Wetzlar显微镜电动平台。

显微镜电动平台在人骨髓基质细胞观察的应用

显微镜电动平台对供体变化和培养时间的影响，即对基因型、表型和功能的影响。

供体变异是一个十分常见的问题，它限制了细胞疗法的适用性。我们假设骨髓基质细胞（BMSCs）在人血小板裂解液（hPL）中繁殖时的批次效应时，取代胎牛血清（FBS），可以影响表型和功能的变异。因此，我们调查了供体变异、hPL与FBS驱动的繁殖和详尽的增殖对BMSC表观基因组、转录组、表型、凝血风险和骨软骨再生功能的影响。值得注意的是，在HPL中的繁殖明显增加了BMSC的增殖，创造了明显不同的基因表达轨迹和独特的表面标志物特征，这已经是在一个段落之后。我们证实在增殖挑战后，FBS扩增的BMSC的增殖潜力明显下降。流式细胞仪验证了培养扩增的BMSCs的典型成纤维细胞表型。我们观察到对DNA甲基化的影响有限，主要是在FBS驱动的培养物中，与培养时间无关。凝血风险随培养时间增加。

此外，在异种血清中扩增导致三维软骨盘形成过程中功能明显丧失，凝血风险明显增加。在HPL-条件下，优越的软骨功能在培养过程中得以保持。血小板血型和异凝血素对BMSC功能的影响很小。这些数据表明，由于血清因素对BMSC转录组、表型和功能有明显的批次影响，仅在一个培养周期后就部分地超过了供体的变化。

我们将骨髓抽吸物被分成50/50，基质细胞被分离出来，并在动物无血清条件下用含有hPLO/AB的BMSC扩增培养基或用含有FBS的培养基进行扩增，我们冷冻保存了BMSC第0段（P°，初级培养结束时），供以后分析。对于大规模扩增，我们将细胞直接播种到四层细胞工厂（CF-4）中，在解冻后的BMSC扩增培养基中补充了hPLO/AB或FBS。从第1阶段（P1）开始，对扩大的BMSCs进行分析或在这些培养基中进一步培养，直到第4-5阶段（P4-5）。在hPLO/AB中P°培养的BMSCs的等分试样被转移到含有hPLmBG的BMSC扩增培养基中，同样培养至P4。对P1和P4的BMSCs进行进一步分析，在选定的实验中，由于不同样品的细胞生长情况不同，我们使用了P4+/-一个通道的样品。所有通道的BMSC群体倍增率（PD）用公式LN（倍增细胞数）/LN（2）计算。理论上的累积细胞数是通过假设所有的细胞都被进一步扩大来计算的，方法是将P1的全部收获的细胞与接下来在较小的培养容器中的P2-3阶段的倍增数相乘。为了量化细胞形态，来自供体一和二的细胞以10,000细胞/cm2的密度播种过夜，用Calcein（LIVE/DEAD™活力/细胞毒性试剂盒Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA）染色20分钟。在10倍放大率下，用装载了倒置显微镜载物台（MärzhäuserWetzlar, Germany）的EclipseTi倒置显微镜（Nikon, Tokyo, Japan）在相衬和GFP通道下拍摄图像，作为四倍的视场。使用NISAR软件进行阈值处理后检测单个GFP+细胞。提取了1208-1428个单个细胞的包含面积和长度的物体数据并用于统计分析。

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