显微镜电动平台在红细胞研究中的应用——MW

德国Marzhauser公司（MW）是一家专注于显微镜电动载物台领域和手动载物台领域的先进OEM制造商，他们的主要产品有电动/手动载物台、轴控制器、载物台嵌入器、显微操作器、电子控制器等，这篇文章主要介绍了Marzhauser的产品在细胞科研中的前沿科学应用，如：倒置显微镜载物台、机械化样品台、聚焦驱动器和Marzhauser Wetzlar显微镜电动平台。

显微镜电动平台在红细胞研究中的应用

在红细胞 (RBC) 的储存过程中，血袋内的氧饱和度增加和代谢失调发生。它导致红细胞抗氧化保护系统逐渐耗尽，从而导致氧化应激的有害状态，这种状态在所谓的储存损伤的显现中起主要作用。本研究描述了使用基于荧光和无标记形态读数的测试（称为 TSOX）来简单快速地评估各种化合物在受控条件下的氧化剂和抗氧化特性。

将 TSOX 应用于用四种抗氧化剂（抗坏血酸、尿酸、trolox 和白藜芦醇）和三种氧化剂（AAPH、二酰胺和 H 2 O 2处理的红细胞）) 在不同浓度下。选择了两个互补的读数：首先，使用 DCFH-DA 荧光探针量化 ROS 的产生，其次，基于测量形态变化的数字全息显微镜。所有氧化剂都产生荧光增加，而 H 2 O 2没有明显影响红细胞形态。在四分之三的添加分子中观察到了显着的保护作用。值得注意的是，白藜芦醇诱导了菱形“Tirocytes”。选择的分析设计是灵活的，并且与高通量筛选兼容。在未来的实验中，TSOX 将用于筛选化学库和探针分子，这些分子可以添加到用于 RBC 存储的添加剂溶液中。

使用配备MW显微镜载物台 (Märzhäuser Wetzlar，Germany)、培养箱系统 ( LCI Live Cell Instrument，Seoul，South Korea）和20×/0.40NA物镜（Leica Microsystems GmbH，Wetzlar，Germany），如前所述。

如前所述，将红细胞放入CPD-SAGM RCC中并在0.9% NaCl中洗涤两次。然后将细胞沉淀重新悬浮在 HEPA 缓冲液中，并将每孔80'000个RBC (80 µL) 接种在涂有聚-L-鸟氨酸的 96 孔黑色成像板中。HEPA 缓冲液由 130 mM NaCl、5.4 mM KCl、1 mM CaCl 2 *2H 2 O、0.5 mM MgCl 2 *6H 2 O、10 mM 葡萄糖、15 mM Hepes 和 1 mg/mL BSA 组成。为了更快地沉淀细胞，将板轻轻离心（在室温下140× g2分钟）。然后，每孔加入 10 µL 抗氧化剂，60分钟后加入10 µL氧化剂储备溶液 (10×)（共 100 µL）。

为了成像，将板置于显微镜下，置于设置为37 °C和5% CO2的孵育室中。每孔以20倍放大率拍摄四张图像。在任何治疗前以 5 分钟的间隔首先采集四张RBC基线图像。添加抗氧化剂后，板以10分钟间隔成像六次（60分钟孵育）。在用氧化剂处理后，最终每小时拍摄20张延时图像。随访共持续1275分钟（21h15）。

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